Joomla Templates and Joomla Extensions by JoomlaVision.Com
آرتی-پی سی آر (RT-PCR) مشاهده در قالب PDF چاپ فرستادن به ایمیل

آر تي _ پي سي آر (RT-PCR)

(Reverse Transcriptase-PCR)

‏ اين روش به ‏PCR‏ نسخه‌برداري معكوس نيز معروف است كه ماده اوليه در آن ‏RNA‏ است. اولين مرحله در اين روش تبديل ‏RNA‏ به ‏DNA‏ (‏ DNAاي كه مكمل توالي‌هاي ‏mRNA‏ است) توسط آنزيم نسخه‌بردار معكوس می باشد (RT). برخي از موجودات مانند برخي از ويروس‌هاي ‏RNAدار، ژنومشان تنها از ‏RNA‏ ساخته شده است. بعضي از ويروس‌ها مانند ويروس هپاتيت ‏B‏ هرگز به شكل ‏DNA‏ مابين در اثر آنزيم نسخه‌بردار معكوس درنمي‌آيد. آنزيم نسخه‌بردار معكوس (‏RT‏) در اين روش از  "‏Avian Myeloblastosis Virus (AMV)‎‏" و "‏Moloney Murine Leu Kemia Virus (MMLV)‎‏ " به‌دست آمد. 
كاربرد اين آنزيم به‌دليل آن‌كه آنزيم به حرارت حساس بود در ابتدا پايين بود ولي با كشف باكتري به نام "ترموس ترموفيلوس" يك ‏DNA‏ پليمر از مقاوم به نام (‏Tth‏) بهبود يافت كه در حضور يون ‏Mn+2‎‏ داراي فعاليت نسخه‌برداري معكوس است و در دماي 72 درجه سانتي گراد توسط اين آنزيم از روي ‏RNA، ‏DNA‏ ساخته مي‌شود و سپس ‏Mn+2‎‏ اضافي توسط اتيلن گليكول تترااستيك اسید (‏EGTA‏) حذف مي‌شود و سپس اين آنزيم از ‏DNAاي كه خود ساخته استفاده و آن را تكثير مي‌كند.‏

بازدارنده و فعال کننده ی PCR:

فعال کننده:

بازده و ويژگي PCR بوسيله فاكتورهاي مختلفي تحت تأثير قرار مي‏گيرد. كيفيت DNA الگو، طراحي پرايمرها و شرايط PCR مانند غلظت MgCl2،DNA پليمراز و شرايط بافري، همه و همه در بازده و ويژگي تأثير گذار هستند.

برخي از عوامل مهم :

-   پروفايل حرارتي PCR ) چسبيدن پرايمر، پليمريزاسيون، دناتوراسيون، زمان افزايش و كاهش حرارتي ، و تعداد سيكل ها)

-        غلظت يون منيزيوم

-        طراحي پرايمر و غلظت آن

-        كيفيت الگو و غلظت آن

-        بافر PCR

-        غلظت dNTP

-        اضافه كردن ترغيب كننده‏هاي PCR

-        حذر از مواد بازدارنده PCR

-        PCR ثانوي با پرايمرهاي نستد

-        PCR با شروع داغ

 

بازدارنده:

منابع بالقوه آلودگي زيادي قبل از انجام PCR وجود دارد كـه در ايـن تكنيك حسـاس خـود را نمايـان مي‏نمايد. براي مثال اگر نمونه‏هاي كلينيكي به كار رود روش هاي مناسب جهت جمع آوري و نگهداري نمونه بايد اتخاذ گردد. منشاء DNA آلوده كننده مي‏تواند سلولهاي پوست يا موي افراد، سطوح آزمايشگاه و بسياري چيزهاي ديگر باشد. آلودگيهاي قابل انتقال از طريق هوا يكي ديگر از علت هاي آلودگي نمونه‏ها است. واكنشگرها و اجزاء مورد استفاده در PCR يا مراحلي كه در استخراج و تهيه DNA يا RNA الگوي نمونه‏ها به كار مي‏رود از ديگر منابع بالقوه DNA خارجي است. براي مثال، در واكنش PCR ، اجزاء بافر، ژلاتين، پرايمرهاي اليگونوكلئوتيدي، dNTPها و حتي DNA پليمراز ممكن است آلوده گردد.

همچنين ممكن است با مشكلات ديگري از ناحيه مواد مورد استفاده در استخراج يا تهيه نمونه قبل از PCR )بطور مثال آنزيم نسخه بردار معكوس،T4-DNA ليگاز، آنزيم‏هاي محدود كننده، پروتئيناز (K مواجه شويم. نكته مهم اين است كه تمام مواد مورد استفاده در PCR بايدPCR grade  باشند يعني آلودگي با DNA نداشته باشند.

آلودگی هاي منفرد به سادگي قابل كنترل نيستند با اين حال كنترل هاي مختلف در هر مرحله از كار، بخصوص اگر PCR جنبه تشخيص دارد بايد انجام شود. كنترل هاي منفي جهت آزمايش واكنشگرهاي PCR از جهت آلودگي با DNA )بطور مثال DNA ژنوميك، DNA عوامل عفوني يا آلودگي هاي ناشي از محصول قبلي (PCR بايد طراحي شود. كنترلهاي مثبت با نمونه‏هاي حاوي DNA مثبت، از نظر ارزيابي بازده و ويژگي PCRاهميت حياتي دارد.

برخي از عوامل مهم :

- نمونه‏هاي بيولوژيكي )براي مثال از بيماران، حيوانات و ...)

- روش هاي جمع آوري نمونه

- گروه كاري در آزمايشگاه

- محيط آزمايشگاه / تهويه مطبوع

- نيتروژن مايع / يخ

- هوموژنايزر بافت

- پي پت ها / سرسمپلرها

- لوله‏هاي واكنش/ لوازم شيشه‏اي

- واكنشگرها

- محصولات بيولوژيكي يا نوتركيب (مثلا ژلاتين، آلبومين سرم گاو (BSA)، آنزيم‏هاي محدود كننده)

-  هود

- سانتريفوژ/ لوله‏هاي سانتريفوژ

- ميكروتوم

- ترموسايكلر

- ترانس ايلومينيتور UV

- وسايل الكتروفورز

- آلودگي بعد از PCR ناشي از جابجايي محصولات PCR

 

 
  • اگر از اختلال خواب رنج ميبريد از مصرف تنقلات بويژه تخمه ، چيپس و آجيل در هنگام شب بپرهيزيد
  • همواره نشاط خود را حفظ كنيد به ياد داشته باشيد افراد با روحيه كمتر به بيماريها دچار مي شوند و بهتر از سايرين از عهده مقابله با مشكلات زندگي بر مي آيند
  • خوردن زيتون باعث كاهش فشارخون مي‌شود. زيتون علاوه بر اينكه مصرف زيادي در تغذيه دارد ده‌ها خاصيت درماني هم دارد. زيتون داراي اثرنرم‌كنندگي، ملين، صفرا بر است. اين ماده سنگهاي صفراوي را دفع و يبوست‌هاي مزمن را درمان مي‌كند. زيتون همچنين قولنج‌ هاي ناشي از ورم كليه را درمان مي كند و باعث تسكين درد و سوزش سوختگي‌ها، درمان آفتاب‌زدگي و سرمازدگي و گزش حشرات مي‌شود. لازم به ذكر است اين ماده در التيام زخم و جراحات و رفع سوزش و درد اثر دارد و خارش چشم و اشك ريزش را رفع مي‌كند.
  • مصرف روزانه ۵۰۰ mg يا بيشتر از ويتامين C باعث كاهش مدت سرماخوردگي افراد شده و مصرف غذا و نوشيدني‌هاي حاوي اين ويتامين به افراد توصيه مي‌شود. همچنين مصرف آب مخصوصا آب گرم، سبزيجات و ميوه‌هاي تازه و سوپ جو در درمان سرماخوردگي و كاهش زمان ابتلا به اين بيماري مؤثر است. ويروسهاي فراواني باعث سرماخوردگي مي‌شوند و جلوگيري از ابتلا به اين بيماري كار سختي است اما با رژيم غذايي خوب در كاهش زمان سرماخوردگي مي‌تواند اثرگذار باشد.
  • هرگز سیگار نکشید و اگر میکشید ، نیمه آخر آن را هیچ وجه نکشید.
  • در حمام هیچگاه مستقیما زیر دوش آب گرم نفس نکشید. کلر یک قاتل تدریجی است.
  • هنگام شارژ موبایل ابتدا شارژر را به گوشی وصل کنید و سپس آن را به برق وصل کنید. بهتر است موبایل خاموش باشد.
  • چای بیشتر از یک روز مانده را اصلا ننوشید.
  • هنگام روشن کردن کولر اتومبیل خود ابتدا به مدت حداقل 5 دقیقه پنجره ها را باز بگذارید و در پمپ بنزینها کولر را خاموش نمایید.
  • غذای خود را بیشتر از یکبار در مایکروفر گرم نکنید و بعد از آن درصورت عدم استفاده دور بریزید.
  • هنگام غذا بین هرلقمه حداقل 1 دقیقه فاصله بگذارید و دو ساعت قبل و بعد از غذا و هنگام آن نوشیدنی ننوشید.
  • هنگام حرکت اتومبیل، پنجره ها را تماما باز نکنید تا هوا بصورت باد وارد مجاری تنفسی نگردد.
  • لوازم آرایشی را بیشتر از 5 ساعت برروی پوست خود باقی نگذارید. سلولهای پوستی نیاز به تعرق و تنفس دارند. درمنزل نیز تا حد امکان از لباسهای گشاد ، راحت و باز استفاده نمایید.
  • موهای خود را بیش از یکبار در شبانه روز شانه نکنید.مراقب ورود شوره سر (حتی بصورت نامرئی) به چشمها و مجرای تنفسی خود باشید.
  • هنگام دویدن و راه رفتن سر خود را بالا نگهدارید. هنگام نشستن و خوابیدن برعکس سر خود را پایین نگهدارید.
  • توجه بیش از حد به وزن، سودمند نیست. بدن انسان قادر است بصورت خودکار میزان ورودی، جذب و میزان دفع را تنظیم نماید و اشتهای طبیعی نیز متناسب با آن میباشد. هرچه قدر دوست دارید بخورید.
  • اگر نیاز مالی ندارید، لازم نیست روزی 8 ساعت کار کنید. بهترین تعداد ساعات کاری بین 5 الی 6 ساعت میباشد.
  • هرگز پشت مانیتور (های قدیمی) که روشن هستند قرار نگیرید. ضرر آنها از خیلی از دستگاههای عکسبرداری بیشتر است.
  • ورزش و تحرک در ابتدای صبح نه تنها سودمند نیست بلکه خطرناک نیز هست. سعی کنید آن را در حداقل 3 ساعت بعد از بیداری و یا عصر انجام دهید.
  • توجه بیش از حد به امور سیاسی، ورزشی و اقتصادی برای سلامت روان مضر بوده و در دراز مدت به علت عدم امکان تسلط بر کنترل آنها، باعث اختلالات روانی میگردد.
  • معجزه جواهر آلات برای خانمها را فراموش نکنید. حتی اگر صرفا به دیدن آنها باشد.
  • هیچگاه به پهلو نخوابید. سعی کنید در جهت عمود بر محور مغناطیسی زمین بخوابید.

سایت های مرتبط

.


ما را دنبال کنید

FB YouTube

اطلاعات تماس

آدرس: اصفهان, خیابان بزرگمهر, ابتدای خیابان 22 بهمن, ساختمان نورباران طبقه اول, واحد 1

همراه:00989336700380 ، 00989336700390

تلفن: 03132673139

تلفاکس:00983132673139

ایمیل:

info@dnarna.org

sales@dnarna.org

advise@dnarna.org

کانال تلگرام: telegram.me/RNAbiotec

LiveZilla Live Chat Software
LiveZilla Live Help