Joomla Templates and Joomla Extensions by JoomlaVision.Com
استخراج DNA ژنوم گیاهی/ایرازول مشاهده در قالب PDF چاپ فرستادن به ایمیل

استخراج DNA ژنومی گیاه

مقدمه:

استخراج DNA مطلوب از گياه براي بررسي هاي ژنتيكي از اهميت ويژه اي برخوردار است.

در تمامي روش هاي مبتني بر PCR براي اهداف مختلف، استخراج DNA گام اول و مهم مي باشد. هر چه قدر روش استخراج DNA سريع، مقرون به صرفه وDNA حاصل داراي كيفيت بيشتري باشد، براي انجام PCR مناسب تر است.

به طور کلی میشه روش های استخراج رو دو دسته در نظر گرفت:

1- روش هایی که در اون همه ی اجزای شیره ی سلولی تجزیه میشه و فقط DNA مورد نظر ما باقی می مونه (این روش بیشتر در سلول هایی که محتوای کربوهیدرات و چربی کمی دارن مورد استفاده قرار میگیره).

2- روش هایی که در اون دقیقا DNA مورد نظر ما از بقیه ی اجزای شیره ی سلولی جدا میشه.

در هر دو روش اول باید سلول تخریب بشه:

در رابطه با سلول های باکتریایی میشه از آنزیم لیزوزیم برای تخریب دیواره ی سلولی استفاده کرد.

در مورد سلول های جانوری دترجنتهايي DETERGENTS مثل SDS برای این کار مناسب هستند که غشای سلولی رو تخریب می کنند.

اما در سلول های گیاهی که دیواره ی سلولزی محکمی وجود داره روش های پیچیده تری از جمله انجماد مورد استفاده قرار میگیره.

اما اصولی که در شیوه ی اول رعایت میشه:

بعد از تهیه ی شیره ی سلولی اول از سانتریفیوژ استفاده میشه که طی اون تمام اجزای سنگین سلولی مثلا اندامک ها رسوب می کنند. بعد محلول رویی که دارای DNA مورد نظر ماست جدا میشه و پروتئین هاش با فنل رسوب می کنن (فنل باعث ایجاد دو فاز مجزا میشه و پروتئین ها در حد فاصل دو فاز رسوب می کنن) بعدش فاز آبی دارای نوکلئیک اسیدها جدا شده و این بار نوبت RNA هاست که محلول حاویDNA رو ترک کنند و این کار با کمک آنزیم ریبونوکلئاز صورت می گیره حالا میشود DNA سالم موجود در محلول رو به کمک اتانول رسوب داد و استخراج تموم می شود.

و اما در روش دوم مثلا از کروماتوگرافی تعویض یونی استفاده میشه که طی اون بستر ما دارای بار مثبته و مولکول های DNA، RNA و پروتئین های دارای بار منفی بهش می چسبند و بقیه ی مواد از ستون خارج میشند. حالا نوبت می رسه به جدا کردن این مواد از هم که به کمک که محلول های با غلظت نمک متفاوت و در نتیجه قدرت یونی متفاوت صورت می گیرد (همونطور که میدونیم هرچه قدرت یونی بالاتر بره مولکول هایی که محکمتر با بستر میان کنش دارن جدا میشن) اول از محلول های با قدرت کمتر که باعث جدا شدن پروتئین ها میشه و بعد با اضافه شدن قدر یونی به ترتیب RNA و در نهایت DNA جدا میشه.

روشهاي مختلفي براي استخراج DNA از ميوه ها و پياز ارائه شده اند كه دلايل زير براي اعمالي كه در اين روشهاي مختلف انجام مي شود ذكر مي گردد:

1-چليت كردن كاتيون هاي دو ظرفيتي مانند Ca2+, Mg2+ به وسيله نمك براي متوقف كردن اعمال آنزيم تجزيه كنندهDNA (دي ان آزDNase-) همچنين نمك مي تواند انتهاهاي فسفات DNA را به هم نزديك كند

و در نتيجه رسوب آن را آسانتر نمايد.

2-خرد كردن سلولها به وسيله رنده كردن

3- ازبين بردن ليپيدهاي غشاء به وسيله اضافه كردن دترجنت و در نتيجه شكسته شدن غشاء

4-از بين بردن پروتئين هاي سلول و هيستون ها ي متصل بهDNA به وسيله اضافه كردن يك پروتئاز و يا ته نشين كردن آنها با استات سديم يا آمونيوم و يا نمك آشپزخانه

5-رسوب DNA در اتانول يا ايزوپروپانول سرد زيرا DNA در الكل نامحلول است اما در آب محلول است به هم مي چسبند و اين مرحله همچنين نمك را خارج مي كند.

6-حرارت دادن(50 تا 60 درجه سانتي گراد) نه تنها به شكستن سلولها كمك مي كند بلكه باعث غير فعال شدن آنزيم هايDNase نيز مي شود البته حرارت دادن اگر زياد طول بكشد خودDNA را نيزتجزيه مي كند. به همين علت در روشهائي كه از حرارت استفاده مي شود بايستي حد اكثر 12 دقيقه عصاره را در حمام آب گرم قرار داد و سپس بلافاصله جهت جلوگيري از انهدامDNA عصاره را در حمام آب سرد-يخ به مدت15 -5 دقيقه قرار داد.

7-كج نگاه داشتن لوله و سپس اضافه كردن الكل سرد مانع از مخلوط شدن عصاره و الكل ميگرددو در نتيجه دو فاز تشكيل مي گردد.

شرح آزمایش :

1 ) آماده سازی محلول = مقدار 1.5 گرم نمك وcc 120 آب مقطر را در يك بشر cc 100ریختیم.آنها را مخلوط كردیم تا نمك كاملا ً حل شود.5 گرم جوش شیرین و همچنین 5 ml صابون مایع اضافه کردیم .

2 ) نصف پیاز را بریده و در هاون کوبیدیم.

3 ) 10 mlعصاره پیاز + 20 mlمحلول شماره 1 ← 30 Min روی استیرر

4 ) انتقال به لوله آزمایش ← 5min  در یخچال

5 ) محلول را از کاغذ صافی رد کردیم

6 ) اضافه کردن الکل سرد

7 ) خارج کردن DNA  با استفاده از یله شیشه ای

8 ) انتقال به میکرتیوپ

9 ) سانتریفوژ

10) بافر TB

برای حذف این مراحل طولانی و برای برای راحتر کردن کار می توان از کیت های استخراج DNA استفاده کرد که باعث می شود سرعت عمل کار بالا بره که مزایای کیت های استخراج DNA عبارتند از:

ويژگی ها و مزايای کیت استخراج dna

-   استخراج سريع و كارآمد از انواع نمونه ها
- کاربری ساده و سريع
-  گرفتن نتيجه در زمان کوتاه: کمتر از 30 دقيقه
-   قابليت نگهداری در شرايط دمای محيط
-   به حداقل رساندن آسيب های وارده به اسيدهای نوکلئيک در حين عمل استخراج
-   حذف مهارکننده هاي آنزيمی مزاحم PCR
-   عدم نياز به حلال های آلی مضر مثل فنل
-   عدم وجود مراحل رسوب دهی
-   درجۀ تخليص بالا A260/A280>1.8

بجز موارد عنوان شده این کیت این قابلیت را دارد که بصورت موثر بتوانند محتوای DNA انواع موجودات را استخراج کرد. این کیت استخراج DNA از3 نوع گیاه مختلف نمایش داده شده است. نقطه جالب و مورد توجه این است که این نوع بافر ابدایی توان استخراج DNA را در عرض 20-25 دقیقه داراست که میتوان DNA استخراج شده را بصورت مستقیم جهت انجام pcr استفاده کرد.

 

 
  • اگر از اختلال خواب رنج ميبريد از مصرف تنقلات بويژه تخمه ، چيپس و آجيل در هنگام شب بپرهيزيد
  • همواره نشاط خود را حفظ كنيد به ياد داشته باشيد افراد با روحيه كمتر به بيماريها دچار مي شوند و بهتر از سايرين از عهده مقابله با مشكلات زندگي بر مي آيند
  • خوردن زيتون باعث كاهش فشارخون مي‌شود. زيتون علاوه بر اينكه مصرف زيادي در تغذيه دارد ده‌ها خاصيت درماني هم دارد. زيتون داراي اثرنرم‌كنندگي، ملين، صفرا بر است. اين ماده سنگهاي صفراوي را دفع و يبوست‌هاي مزمن را درمان مي‌كند. زيتون همچنين قولنج‌ هاي ناشي از ورم كليه را درمان مي كند و باعث تسكين درد و سوزش سوختگي‌ها، درمان آفتاب‌زدگي و سرمازدگي و گزش حشرات مي‌شود. لازم به ذكر است اين ماده در التيام زخم و جراحات و رفع سوزش و درد اثر دارد و خارش چشم و اشك ريزش را رفع مي‌كند.
  • مصرف روزانه ۵۰۰ mg يا بيشتر از ويتامين C باعث كاهش مدت سرماخوردگي افراد شده و مصرف غذا و نوشيدني‌هاي حاوي اين ويتامين به افراد توصيه مي‌شود. همچنين مصرف آب مخصوصا آب گرم، سبزيجات و ميوه‌هاي تازه و سوپ جو در درمان سرماخوردگي و كاهش زمان ابتلا به اين بيماري مؤثر است. ويروسهاي فراواني باعث سرماخوردگي مي‌شوند و جلوگيري از ابتلا به اين بيماري كار سختي است اما با رژيم غذايي خوب در كاهش زمان سرماخوردگي مي‌تواند اثرگذار باشد.
  • هرگز سیگار نکشید و اگر میکشید ، نیمه آخر آن را هیچ وجه نکشید.
  • در حمام هیچگاه مستقیما زیر دوش آب گرم نفس نکشید. کلر یک قاتل تدریجی است.
  • هنگام شارژ موبایل ابتدا شارژر را به گوشی وصل کنید و سپس آن را به برق وصل کنید. بهتر است موبایل خاموش باشد.
  • چای بیشتر از یک روز مانده را اصلا ننوشید.
  • هنگام روشن کردن کولر اتومبیل خود ابتدا به مدت حداقل 5 دقیقه پنجره ها را باز بگذارید و در پمپ بنزینها کولر را خاموش نمایید.
  • غذای خود را بیشتر از یکبار در مایکروفر گرم نکنید و بعد از آن درصورت عدم استفاده دور بریزید.
  • هنگام غذا بین هرلقمه حداقل 1 دقیقه فاصله بگذارید و دو ساعت قبل و بعد از غذا و هنگام آن نوشیدنی ننوشید.
  • هنگام حرکت اتومبیل، پنجره ها را تماما باز نکنید تا هوا بصورت باد وارد مجاری تنفسی نگردد.
  • لوازم آرایشی را بیشتر از 5 ساعت برروی پوست خود باقی نگذارید. سلولهای پوستی نیاز به تعرق و تنفس دارند. درمنزل نیز تا حد امکان از لباسهای گشاد ، راحت و باز استفاده نمایید.
  • موهای خود را بیش از یکبار در شبانه روز شانه نکنید.مراقب ورود شوره سر (حتی بصورت نامرئی) به چشمها و مجرای تنفسی خود باشید.
  • هنگام دویدن و راه رفتن سر خود را بالا نگهدارید. هنگام نشستن و خوابیدن برعکس سر خود را پایین نگهدارید.
  • توجه بیش از حد به وزن، سودمند نیست. بدن انسان قادر است بصورت خودکار میزان ورودی، جذب و میزان دفع را تنظیم نماید و اشتهای طبیعی نیز متناسب با آن میباشد. هرچه قدر دوست دارید بخورید.
  • اگر نیاز مالی ندارید، لازم نیست روزی 8 ساعت کار کنید. بهترین تعداد ساعات کاری بین 5 الی 6 ساعت میباشد.
  • هرگز پشت مانیتور (های قدیمی) که روشن هستند قرار نگیرید. ضرر آنها از خیلی از دستگاههای عکسبرداری بیشتر است.
  • ورزش و تحرک در ابتدای صبح نه تنها سودمند نیست بلکه خطرناک نیز هست. سعی کنید آن را در حداقل 3 ساعت بعد از بیداری و یا عصر انجام دهید.
  • توجه بیش از حد به امور سیاسی، ورزشی و اقتصادی برای سلامت روان مضر بوده و در دراز مدت به علت عدم امکان تسلط بر کنترل آنها، باعث اختلالات روانی میگردد.
  • معجزه جواهر آلات برای خانمها را فراموش نکنید. حتی اگر صرفا به دیدن آنها باشد.
  • هیچگاه به پهلو نخوابید. سعی کنید در جهت عمود بر محور مغناطیسی زمین بخوابید.

سایت های مرتبط

.


ما را دنبال کنید

FB YouTube

اطلاعات تماس

آدرس: اصفهان, خیابان بزرگمهر, ابتدای خیابان 22 بهمن, ساختمان نورباران طبقه اول, واحد 1

همراه:00989336700380 ، 00989336700390

تلفن: 03132673139

تلفاکس:00983132673139

ایمیل:

info@dnarna.org

sales@dnarna.org

advise@dnarna.org

کانال تلگرام: telegram.me/RNAbiotec

LiveZilla Live Chat Software
LiveZilla Live Help